روش تشخیص صفحات tlc چیست؟

کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) یک تکنیک کروماتوگرافی پرکاربرد در شیمی تجزیه، بیوشیمی و تحقیقات دارویی است. صفحات TLC نقش مهمی در این فرآیند ایفا می کنند و به عنوان فاز ثابتی عمل می کنند که در آن جداسازی اجزا اتفاق می افتد. پس از اجرای آزمایش TLC، مرحله بعدی شناسایی ترکیبات جدا شده روی صفحه TLC است. در این وبلاگ، به عنوان تامین کننده صفحات TLC، چندین روش تشخیص متداول برای صفحات TLC را معرفی خواهم کرد.

تشخیص بصری

تشخیص بصری ساده ترین و ساده ترین روش برای تجزیه و تحلیل TLC است. زمانی که ترکیبات جدا شده رنگی باشند قابل استفاده است. به عنوان مثال، در تجزیه و تحلیل رنگدانه های طبیعی مانند کلروفیل و کاروتنوئیدها، این رنگدانه ها دارای رنگ های مشخصی هستند که می توان مستقیماً روی صفحه TLC مشاهده کرد. لکه های رنگی جدا شده را می توان به راحتی شناسایی کرد و مقادیر Rf (ضریب نگهداری) آنها را محاسبه کرد.

با این حال، بیشتر ترکیبات آلی بی رنگ هستند که تشخیص بصری را غیرممکن می کند. در چنین مواقعی باید از روش‌های تشخیص دیگری برای نمایان شدن ترکیبات استفاده کنیم.

تشخیص UV

تشخیص اشعه ماوراء بنفش (UV) یکی از متداول ترین روش های مورد استفاده برای تجزیه و تحلیل TLC است. بسیاری از ترکیبات آلی نور فرابنفش را جذب می‌کنند، یا به دلیل وجود کروموفورهایی مانند حلقه‌های معطر، پیوندهای دوگانه کربن - کربن یا گروه‌های کربونیل.

برای انجام تشخیص UV، یک صفحه TLC زیر یک لامپ UV قرار می گیرد. دو نوع لامپ UV وجود دارد که معمولاً استفاده می شود: UV موج کوتاه (254 نانومتر) و UV موج بلند (365 نانومتر). هنگامی که یک ترکیب روی صفحه TLC نور ماوراء بنفش را جذب می کند، اگر صفحه TLC از قبل با یک نشانگر فلورسنت پوشانده شده باشد، ممکن است به عنوان یک نقطه تاریک در برابر پس زمینه فلورسنت ظاهر شود. نشانگر فلورسنت وقتی در معرض نور UV قرار می گیرد نور مرئی ساطع می کند و ترکیبی که نور UV را جذب می کند فلورسانس را خاموش می کند و یک نقطه تاریک ایجاد می کند.

تشخیص اشعه ماوراء بنفش غیر مخرب است، به این معنی که ترکیبات روی صفحه TLC را می توان در صورت نیاز بیشتر تجزیه و تحلیل کرد. همچنین نسبتاً سریع و حساس است و قادر به تشخیص مقادیر کمی از ترکیبات است. برای اطلاعات بیشتر در مورد صفحات TLC مناسب برای تشخیص UV، می توانید ما را بررسی کنیدصفحات آلومینیومی TLCوصفحات TLC شیشه ایکه برای ارائه عملکرد عالی در تشخیص UV طراحی شده اند.

تشخیص شیمیایی

تشخیص شیمیایی شامل استفاده از معرف های شیمیایی برای واکنش با ترکیبات روی صفحه TLC، تولید محصولات رنگی یا فلورسنت است که به راحتی قابل مشاهده است. معرف های شیمیایی مختلف زیادی وجود دارد که هر کدام مخصوص انواع خاصی از ترکیبات هستند.

تشخیص بخار ید

بخار ید یک معرف عمومی است که می تواند با بسیاری از ترکیبات آلی، به ویژه آنهایی که دارای پیوندهای دوگانه یا حلقه های معطر هستند، واکنش نشان دهد. برای استفاده از بخار ید برای تشخیص، یک صفحه TLC در یک محفظه بسته حاوی کریستال های ید قرار می گیرد. ید تصعید شده و بخار تشکیل می دهد که با ترکیبات روی صفحه TLC واکنش می دهد و لکه های قهوه ای یا زرد ایجاد می کند. تشخیص ید برگشت پذیر است، زیرا می توان ید را از ترکیبات با اجازه دادن به صفحه برای مدتی در هوا خارج کرد. این باعث می شود آن را برای تجزیه و تحلیل بیشتر از ترکیبات مناسب است.

معرف های مبتنی بر اسید سولفوریک

معرف های مبتنی بر اسید سولفوریک اغلب برای تشخیص ترکیبات آلی مانند کربوهیدرات ها، استروئیدها و لیپیدها استفاده می شوند. به عنوان مثال، محلول اسید سولفوریک و اتانول را می توان روی صفحه TLC اسپری کرد و سپس حرارت داد. اسید سولفوریک ترکیبات آلی را کم آب می کند و لکه های زغالی ایجاد می کند که به راحتی قابل مشاهده هستند. با این حال، این روش مخرب است، زیرا ترکیبات در طول فرآیند تشخیص از نظر شیمیایی اصلاح می شوند.

تشخیص نین هیدرین

نین هیدرین یک معرف خاص برای تشخیص آمینو اسیدها و آمین ها است. هنگامی که نین هیدرین با اسیدهای آمینه یا آمین های موجود در صفحه TLC واکنش می دهد، ترکیبی بنفش رنگ به نام بنفش روهمان را تشکیل می دهد. این واکنش بسیار حساس است و معمولاً در تجزیه و تحلیل پروتئین ها و پپتیدها استفاده می شود.

تشخیص فلورسانس

تشخیص فلورسانس زمانی استفاده می شود که ترکیبات مورد تجزیه و تحلیل فلورسنت هستند یا می توانند از طریق مشتق سازی فلورسانس شوند. برخی از ترکیبات دارای فلورسانس ذاتی هستند، مانند برخی محصولات طبیعی و برخی داروهای دارویی. در موارد دیگر، ترکیبات غیر فلورسنت را می توان با معرف های فلورسنت واکنش داد تا آنها را فلورسنت کند.

تشخیص فلورسانس حساسیت و گزینش پذیری بالایی را ارائه می دهد. این می تواند مقادیر بسیار کمی از ترکیبات را تشخیص دهد و برای تجزیه و تحلیل ردیابی مناسب است. یک آشکارساز فلورسانس برای تحریک ترکیبات فلورسنت روی صفحه TLC و اندازه گیری فلورسانس ساطع شده استفاده می شود. از شدت فلورسانس می توان برای تعیین کمیت مقدار ترکیب موجود استفاده کرد.

تشخیص رادیواکتیو

تشخیص رادیواکتیو زمانی استفاده می شود که ترکیبات مورد تجزیه و تحلیل نشاندار شده باشند. این روش معمولاً در تحقیقات بیوشیمیایی و دارویی استفاده می شود، جایی که ترکیبات نشاندار شده با رادیواکتیو برای مطالعه مسیرهای متابولیک، توزیع دارو و برهمکنش پروتئین - لیگاند استفاده می شود.

یک صفحه TLC با ترکیبات نشاندار رادیویی در تماس با یک فیلم حساس به تشعشع یا صفحه نمایش فسفر قرار می گیرد. انتشار رادیواکتیو از ترکیبات، فیلم را در معرض دید قرار می دهد یا صفحه فسفر را تحریک می کند و تصویری تولید می کند که توزیع ترکیبات نشاندار شده رادیویی را در صفحه TLC نشان می دهد. تشخیص رادیواکتیو بسیار حساس است و می تواند سطوح بسیار پایین رادیواکتیو را تشخیص دهد.

انتخاب روش تشخیص مناسب

هنگام انتخاب یک روش تشخیص برای صفحات TLC، چندین فاکتور باید در نظر گرفته شود:

ماهیت ترکیبات

ساختار شیمیایی و خواص ترکیبات مورد تجزیه و تحلیل تعیین می کند که کدام روش تشخیص مناسب تر است. به عنوان مثال، اگر ترکیبات رنگی باشند، می توان مستقیماً از تشخیص بصری استفاده کرد. اگر آنها حاوی کروموفور هستند، تشخیص UV ممکن است مناسب باشد. برای اسیدهای آمینه، تشخیص نین هیدرین انتخاب خوبی است.

الزامات حساسیت

مقدار نمونه موجود و سطح مورد نیاز حساسیت تشخیص نیز در انتخاب روش نقش دارد. تشخیص فلورسانس و تشخیص رادیواکتیو عموماً حساس تر از تشخیص بخار بصری یا ید هستند و برای تجزیه و تحلیل ردیابی مناسب هستند.

مخرب بودن

در صورت نیاز به تجزیه و تحلیل بیشتر ترکیبات روی صفحه TLC، روش های تشخیص غیر مخرب مانند تشخیص UV و تشخیص بخار ید باید انتخاب شوند. روش های مخرب مانند معرف های مبتنی بر اسید سولفوریک تنها زمانی مناسب هستند که ترکیبات نیازی به بازیابی نداشته باشند.

به عنوان یک تامین کننده صفحات TLC

به عنوان یک تامین کننده صفحات TLC، ما اهمیت ارائه صفحات TLC با کیفیت بالا را که با روش های تشخیص مختلف سازگار هستند را درک می کنیم. ماصفحات آلومینیومی TLCوصفحات TLC شیشه ایبا فازهای ثابت با خلوص بالا ساخته شده اند و برای ارائه عملکرد عالی جداسازی و تشخیص طراحی شده اند.

ما همچنین به مشتریان خود پشتیبانی فنی ارائه می دهیم و به آنها کمک می کنیم صفحات TLC و روش های تشخیص مناسب را برای کاربردهای خاص خود انتخاب کنند. چه محقق در یک آزمایشگاه دانشگاه، یک تحلیلگر کنترل کیفیت در یک شرکت داروسازی، یا یک دانشمند در یک مؤسسه تحقیقات شیمیایی، ما می توانیم محصولات و خدمات مورد نیاز شما را ارائه دهیم.

اگر علاقه مند به خرید صفحات TLC ما هستید یا در مورد روش های تشخیص TLC سؤالی دارید، لطفاً برای بحث در مورد خرید با ما تماس بگیرید. ما مشتاقانه منتظر همکاری با شما هستیم تا نیازهای کروماتوگرافی شما را برآورده کنیم.

مراجع

• اسنایدر، ال‌آر، کرکلند، جی‌جی، و گلاج، جی‌ال (2010). توسعه روش HPLC عملی. جان وایلی و پسران
• استال، ای. (1969). کروماتوگرافی لایه نازک: کتابچه راهنمای آزمایشگاهی. Springer - Verlag.
• مک رینولدز، WO (1970). کروماتوگرافی گازی: یک رویکرد عملی. چاپ پرگامون.