سلام! من به عنوان تأمین کننده رسانه کروماتوگرافی ، دست اول را دیدم که چگونه مقدار pH می تواند تأثیر زیادی در عملکرد این مواد مهم داشته باشد. در این وبلاگ ، من می خواهم تجزیه کنم که چگونه PH بر رسانه های کروماتوگرافی تأثیر می گذارد و چرا درست کردن آن بسیار مهم است.
اول از همه ، بیایید سریعاً به آنچه رسانه های کروماتوگرافی است بپردازیم. این اساساً ماده مورد استفاده در ستون های کروماتوگرافی برای جدا کردن اجزای مختلف در یک مخلوط است. انواع رسانه های کروماتوگرافی در آنجا وجود دارد ، مانندبسته بندی آمورف مبتنی بر سیلیسباکروی مبتنی بر سیلیسوتژل سیلیس 60بشر هر نوع ویژگی های منحصر به فرد خود را دارد و برای برنامه های مختلف مناسب است.
حال ، بیایید در مورد ph صحبت کنیم. مقیاس pH از 0 تا 14 متغیر است و 7 نفر خنثی هستند. pH زیر 7 اسیدی است و pH بالاتر از 7 اساسی است. pH فاز موبایل (مایعی که از طریق ستون کروماتوگرافی جریان می یابد) می تواند به طور قابل توجهی بر نحوه عملکرد رسانه کروماتوگرافی تأثیر بگذارد.
یکی از اصلی ترین راه های تأثیر pH ، رسانه کروماتوگرافی از طریق تأثیر آن بر بار سطح رسانه است. بیشتر رسانه های کروماتوگرافی گروه هایی را روی سطح خود قرار داده اند. به عنوان مثال ، رسانه های مبتنی بر سیلیس اغلب دارای گروه های سیلانول (-SI-OH) در سطح هستند. در مقادیر pH پایین (شرایط اسیدی) ، این گروه های سیلانول پروتئین می شوند (یون هیدروژن ، H+) را به دست می آورند. این بدان معناست که سطح رسانه ها کمتر از شارژ منفی می شوند.
هنگامی که شارژ سطح تغییر می کند ، می تواند بر نحوه تعامل آنالیت ها (موادی که ما سعی در جدا کردن آن داریم) بر نحوه تعامل با رسانه ها تأثیر بگذارد. آنالیت ها بسته به ساختار شیمیایی آنها می توانند هزینه های مختلفی داشته باشند. اگر رسانه ها و آنالیت ها هزینه های مشابهی داشته باشند ، یکدیگر را دفع می کنند. از طرف دیگر ، اگر هزینه های مخالف داشته باشند ، آنها را جذب می کنند. بنابراین ، با تنظیم pH ، می توانیم تعامل الکترواستاتیک بین آنالیت ها و محیط کروماتوگرافی را کنترل کنیم.
بیایید بگوییم که ما از یک کروماتوگرافی کاتیون استفاده می کنیم. این نوع رسانه ها گروه های منفی را بر روی سطح خود قرار داده اند که آنالیت های مثبت را به خود جلب می کنند. اگر pH فاز موبایل خیلی کم باشد ، ممکن است هزینه های منفی در رسانه به دلیل پروتئین کاهش یابد. در نتیجه ، جذابیت بین رسانه ها و آنالیت های بار مثبت ضعیف تر خواهد بود. این می تواند به جدایی ضعیف منجر شود ، زیرا آنالیت ها ممکن است به اندازه کافی به رسانه ها متصل نشوند و خیلی سریع از ستون خارج شوند.
در مقابل ، در مقادیر pH بالا (شرایط اساسی) ، گروه های سیلانول در رسانه های مبتنی بر سیلیس محروم می شوند (یون هیدروژن را از دست می دهند). این امر باعث می شود سطح رسانه ها منفی بیشتری داشته باشند. در یک تنظیم کروماتوگرافی کاتیون ، این می تواند اتصال آنالیت های بار مثبت را تقویت کند. با این حال ، اگر pH خیلی زیاد باشد ، می تواند مشکلاتی نیز ایجاد کند. برای رسانه های مبتنی بر سیلیس ، شرایط اساسی شدید می تواند منجر به هیدرولیز ماتریس سیلیس شود. این بدان معنی است که ساختار سیلیس شروع به تجزیه می کند ، که می تواند به رسانه ها آسیب برساند و با گذشت زمان بر عملکرد آن تأثیر بگذارد.
جنبه دیگری که تحت تأثیر pH قرار دارد ، حلالیت آنالیت ها است. برخی از آنالیت ها در محلول های اسیدی محلول تر هستند ، در حالی که برخی دیگر در محلول های اساسی محلول تر هستند. اگر pH فاز موبایل برای حلالیت آنالیت ها بهینه نشود ، ممکن است در داخل ستون رسوب کنند. این می تواند ستون را مسدود کرده و روند جداسازی را خراب کند.
pH همچنین می تواند بر انتخاب رسانه کروماتوگرافی تأثیر بگذارد. انتخابی به توانایی رسانه برای جدا کردن آنالیت های مختلف از یکدیگر اشاره دارد. با تغییر pH ، می توانیم وابستگی های نسبی آنالیت های مختلف را برای رسانه ها تغییر دهیم. به عنوان مثال ، دو آنالیت مشابه ممکن است مقادیر PKA مختلفی داشته باشند (pH که در آن 50 ٪ یونیزه شده اند). با تنظیم pH فاز موبایل در اطراف مقادیر PKA آنها ، می توانیم یک آنالیت را به شدت به رسانه ها نسبت به دیگری متصل کنیم و جدایی بین آنها را بهبود بخشیم.
بیایید نگاهی به نمونه های عملی بیندازیم. در تجزیه و تحلیل دارویی ، از کروماتوگرافی به طور گسترده ای برای جدا کردن و کمیت ترکیبات مختلف دارویی استفاده می شود. اگر pH فاز موبایل درست نباشد ، می تواند به نتایج نادرست منجر شود. به عنوان مثال ، اگر یک داروی دارای یک گروه عملکردی اساسی باشد و pH فاز متحرک خیلی کم باشد ، ممکن است این دارو پروتون شود و به درستی با رسانه کروماتوگرافی تعامل نداشته باشد. این می تواند منجر به گسترش اوج شود (قله های موجود در کروماتوگرام گسترده تر و کمتر تعریف می شوند) یا حتی باعث می شود برخی از داروها در طول تجزیه و تحلیل از دست بروند.
در تجزیه و تحلیل محیطی ، از کروماتوگرافی برای تشخیص و اندازه گیری آلاینده ها در نمونه های آب ، هوا و خاک استفاده می شود. pH نمونه و فاز متحرک می تواند تأثیر زیادی در جداسازی این آلاینده ها داشته باشد. به عنوان مثال ، یونهای فلزی سنگین بسته به pH می توانند مجتمع های مختلفی را تشکیل دهند. با تنظیم pH ، می توانیم اطمینان حاصل کنیم که این یونهای فلزی به طور مؤثر از سایر اجزای موجود در نمونه جدا می شوند.
بنابراین ، چگونه pH را برای کروماتوگرافی بهینه می کنیم؟ این معمولاً شامل کمی آزمایش و خطا است. ابتدا باید خصوصیات شیمیایی آنالیت ها و رسانه کروماتوگرافی را درک کنیم. ما می توانیم به مقادیر PKA آنالیت ها و دامنه پایداری pH رسانه نگاه کنیم. سپس ، می توانیم با آزمایش مقادیر pH مختلف فاز موبایل و مشاهده نتایج جداسازی شروع کنیم. ما می توانیم از پارامترهای کروماتوگرافی مانند وضوح استفاده کنیم (چقدر دو قله از هم جدا می شوند) ، زمان احتباس (چه مدت یک آنالیت طول می کشد تا از ستون بیرون بیاید) و شکل اوج برای ارزیابی عملکرد در مقادیر pH مختلف.
ما به عنوان یک تأمین کننده رسانه کروماتوگرافی ، ما طیف گسترده ای از محصولات را از جمله ارائه می دهیمبسته بندی آمورف مبتنی بر سیلیسباکروی مبتنی بر سیلیسوتژل سیلیس 60بشر ما همچنین می توانیم پشتیبانی فنی را برای کمک به شما در بهینه سازی pH برای برنامه های کروماتوگرافی خاص خود ارائه دهیم. اگر در دریافت نتایج جداسازی مناسب مشکل دارید یا در مورد انتخاب بهترین رسانه کروماتوگرافی برای پروژه خود به مشاوره نیاز دارید ، از دستیابی به آن دریغ نکنید. ما در اینجا هستیم تا به شما کمک کنیم تا از آزمایش های کروماتوگرافی خود بیشترین بهره را ببرید. این که آیا شما در یک آزمایشگاه تحقیقاتی ، یک بخش کنترل کیفیت یا یک مرکز تولید صنعتی هستید ، ما محصولات و تخصص خود را برای رفع نیازهای شما بدست آورده ایم. بنابراین ، اگر علاقه مند به خرید رسانه های کروماتوگرافی ما هستید یا به اطلاعات بیشتری نیاز دارید ، فقط برای یک گپ دوستانه در مورد نیازهای خود با ما تماس بگیرید.
منابع
- Snyder ، LR ، Kirkland ، JJ ، & Glajch ، JL (2010). توسعه روش HPLC عملی. جان ویلی و پسران.
- Poole ، CF (2003). کروماتوگرافی امروز. Elsevier